2.1.6. Preparación de los medios de cultivo

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento adecuado de vegetales. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de cultivo in vitro, por lo que un control en su preparación, conservación y uso, asegura la exactitud y confiabilidad de los resultados obtenidos.

Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

v  Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica adecuada.

v  Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.

Procedimiento:

ü  Calcular las cantidades necesarias de los componentes del medio a partir del volumen de medio a preparar.

ü  Añadir unos 100 ml de agua destilada en el recipiente escogido para preparar el medio.

ü  Añadir el volumen necesario de las soluciones de macronutrientes, micronutirentes, hierro, vitaminas y reguladores de crecimiento (en su caso).

ü  Añadir la cantidad de sacarosa requerida y agitar hasta disolución completa.

ü  Ajustar al volumen final con agua destilada.

ü  Ajustar el pH a 5.7 con la ayuda de soluciones 0.1 M de HCl o OHNa.

ü  Añadir el gelificante (phytagel).

ü  Disolver el gelificante con calor (agitador magnético con calefacción, autoclave, horno microondas).

ü  Dosificar en el recipiente de cultivo (tubos, cajas magenta, baby foods…) y rotularlos adecuadamente.

ü  Esterilizar el medio y su recipiente en autoclave a 121 ºC (15 p.s.i). durante 15 minutos.

ü  Guardar el material utilizado hasta el momento de su utilización.

Bibliografia: